卤虫是一类广泛分布于世界沿海盐田和内陆盐湖等的小型甲壳动物,属于节肢动物门、甲壳纲、鳃足亚纲、无甲目、卤虫科。由于其成体中含有多种蛋白质等营养成分,可增强鱼虾的抗病力和对环境的适应性,是养殖虾、蟹类幼体培育后期及仔虾期的重要鲜活饵料。国内外研究表明卤虫可携带鳗弧菌、野田村病毒、感染性肝胰腺坏死病毒和白斑病毒等病原微生物。鉴于目前国内外虾肝肠胞虫的流行,我们抽取了卤虫样品进行了肠胞虫的检测,并检测到了该病原的携带,现将有关情况总结如下。
从杭州市南美白对虾主养区5处养民处获取其购买的商品化冰冻成体卤虫10个批次,商品化卤虫卵5个批次,以及由商品化卤虫卵孵化所得的卤虫幼体10批次,用95%酒精溶液浸泡保存于-20℃备用。
二、 检测方法
使用巢式PCR方法对获取样品进行肠胞虫检测。DNA提取使用Qiagen DNA Mini Kit试剂盒。第一步扩增引物为:779F:CAGCAGGCGCGAAAATTGTCCA和779R:AAGAGATATTGTATTGCGCTTGCTG。扩增程序为94°C 3分钟;94°C 29秒, 60°C 29秒, 72°C 29秒, 35个循环;72°C 5分钟。第二步扩增引物为176F:CAACGCGGGAAAACTTACCA和176R:ACCTGTTATTGCCTTCTCCCTCC。扩增程序为94°C 3分钟;94°C 20秒,68°C 20秒, 72°C 20秒, 35 个循环;72°C 5分钟。PCR产物经电泳后,回收第二步扩增阳性条带,送Takara公司进行克隆测序。测序所得序列通过NCBI的BLAST检索系统进行序列同源性分析。
从检测的情况来看,商品化卤虫卵及其孵化所得的卤虫幼体未检测到虾肝肠胞虫的携带,说明在一定程度上,其安全性可能要高于冰冻的成体卤虫。但卤虫卵是否可携带肠胞虫,卤虫样品中的肠胞虫是机械性携带还是感染,如果是感染,是否可在卤虫世代中进行垂直传播,这些问题均有待于进一步研究。从指导生产的角度,有必要提醒广大对虾养民,注意市售卤虫的质量,有条件的地方在使用前,要对卤虫进行相关检测,确保没有问题之后再使用。