免疫荧光染色在病理染色领域中的应用还是比较普遍的，之前我们有介绍过免疫荧光染色的方法，今天我们来说一说间接免疫荧光法的注意事项：
1.荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，会使荧光减弱。
2.每次试验时，需设置以下三种对照：
阳性对照：阳性血清+荧光标记物；
阴性对照：阴性血清+荧光标记物；
荧光标记物对照：PBS+荧光标记物；
3.标本片需在操作的各个步骤中，始终保持湿润，避免干燥。
4.一抗和二抗应始终保持在标本片上，避免因放置不平使液体流失，从而造成非特异性荧光染色。