一、核心原理：抗原-抗体特异性结合
三步反应链：
1. 一抗特异性识别组织中的目标抗原
2. 二抗结合一抗的Fc段，带标记物
3. 标记物（HRP/AP）催化底物显色
关键概念：
直接法：一抗直接带标记，少一步但信号弱
间接法：二抗放大信号，最常用
SP法/ABC法：生物素-链霉亲和素系统，进一步放大
二、IHC完整实验流程（石蜡切片）
抗原修复的方法及修复液的选择
DAB显色（在镜下观察，别计时）
正确操作：
DAB试剂现配现用，滴加后立刻放显微镜下观察；
看到特异性部位出现棕黄色，背景还没脏的时候，立刻拿下来泡水里终止；
显色时间一般30秒到5分钟，每个片子都不一样，不要计时！
显色太浅：
• 抗原修复不够
• 一抗浓度太低或孵育时间不够
• DAB试剂失效
• 显色时间太短
背景太深：
• 一抗浓度太高
• 封闭不够
• 洗涤不充分
• DAB显色过久
来源:http://www.sxyksw.com/news1097228.html