WB背景高的原因有哪些
原因 | 解决办法 |
抗体浓度太高 | 优化/降低一抗和二抗的浓度 |
抗体孵育温度过高 | 4℃孵育 |
二抗非特异性结合或与封闭剂交叉反应 | 设置二抗对照(不加一抗),降低二抗浓度 |
一抗或二抗与封闭剂有交叉反应 | 在孵育和洗涤液中加入Tween-20减少交叉反应. |
封闭不充分 | 延长封闭时间，更换合适的封闭剂（脱脂奶粉，BSA，酪蛋白等） |
抗体与其它蛋白质交叉反应 | 更换不同的封闭液；勿在含生物素体系中使用脱脂奶粉封闭；降低二抗浓度；检测二抗与膜的交叉反应性 |
洗膜不充分 | 增加洗涤次数 |
膜干燥 | 保证充分的反应液，避免出现干膜现象 |