DAB(3，3-四盐酸二氨基联苯胺)在免疫组化染色中是最常用的一种显色物质，其对免疫组化染色的结果有着举足轻重的作用，因为它是我们前面多个步骤所要达成最终结果的判定者，它如果出现问题，前面的努力便成泡影，所以不重视它就等于走在了失败的轨迹上。针对这一问题给大家做个解析,并给出一种较好的方法供参照。
1.DAB 对组化染色的影响:
(1)常规的DAB显色液，应无背景着色，阳性结果清晰。
(2) DAB浓度每加0.5倍，背景应无着色，但阳性细胞显色程度要比常规显色液深。
(3)DAB浓度增加1倍，背景应无着色，阳性细胞显色程度更深，对比度增加。
(4)DAB浓度增加2倍，用低倍(x10)、高倍(x40)仔细寻找，难以发现一个阳性细胞。
(5) DAB浓度是常规浓度的3倍时，0.05mol/LTris(pH7.6)缓冲液已不能缓冲过量H+浓度，从而使显色液的颜色由橙色变为深棕色。
(6)pH由3.5变为1的这种pH为酸性的过量DAB显色液，可导致免疫组化染色结果发生质的改变，即本应阳性的结果此时全部为假阴性。
(7)冷冻保存的DAB液与新鲜配制的DAB液显色强度一致，各月份间的显色强度亦无差别，说明冷冻保存 DAB的方法是可靠的，并不影响显色效果。
(8)在进行DAB显色前，不妨先测试一下 DAB显色液pH(表567-1)，若pH在7以下，可用0.05mol/L Tris缓冲液进行调节，并加适量H202。根据经验，只要pH在7.2左右(>7.0)，DAB显色液的颜色就不会发生改变，就能确保DAB显色液的质量。
表567-1 显色液PH值对染色的影响
2.注意事项:DAB是一种多环芳香胺的衍生物，其母体为联苯胺。目前，联苯胺已为国际上公认的致癌物质，为了减少与DAB的接触机会，在工作中应采取一些有效可行的方法:如一步稀释到位，冷冻保存等，既省事又可减少对操作人员的污染机会，是完全可行的。
3.推荐方法:取 DAB 30mg(它可减少因称量过少如1mg所造成的误差)，加60ml 0.05mol/LTis缓冲液，并将其分装为2ml瓶的小包装，置于-18℃--20℃低温冰箱内保存。用时用细目滤纸过滤。加入0.3%H,0,200μl即可。