一、背景技术
在实验动物组织病理学实验研究中，特别是进行原位杂交和免疫组化研究，为避免或减少死后组织形态及结构发生变化，常于动物处死前，采用灌注固定法。灌注固定即通过血管途径将固定液导入所需固定的组织器官内，将活的细胞在原位及时迅速固定，再摘取样品
二、实验原理
心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死之前进行组织的前固定，避免了组织的自溶现象。多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变,从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
三、实验前准备
实验器具: 剪刀1把，眼科剪1把，镊子1把，0.5ml的注射器1个，大头针4个 (可用针头替代)，解剖板1个，止血钳2把，灌注机1整套，止血夹1个，离心管1支，废液缸1个，水合氯醛1瓶，生理盐水1瓶，4%多聚甲醛1瓶。
四、实验步骤
1、先把老鼠麻醉，沿胸骨柄剪开胸腔，剪开心包膜，暴露心脏，。
2、与心尖呈30-45°夹角剪开左心室，将灌注针从左心室插入主动脉，固定针头，再剪开右心耳，然后快速用生理盐水（大鼠100-150ml）冲洗血液，至流出液体血色较浅基本澄清（肝脏、眼珠、爪子迅速变白是排除血液的有效观察标志）。
3、再先快后慢注入4%多聚甲醛250ml（大鼠）固定，先后所需50min，多聚甲醛进入大鼠体内，大鼠会出现四肢、尾的抽搐，最终以肝脏发白、内脏鼓起即灌注好。
4、然后取材，取完后的脑组织再放置4%多聚甲醛中4度冰箱进行后固定，时间12-24小时。。
