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WB实验样本收集方法
 日期:2024/9/20 17:19:00 

一、细胞的采集、处理和保存

    1、细胞板贴壁细胞收集:

   细胞弃培养上清,预冷PBS轻柔洗涤保证完全去除培养基,加少量预冷的PBS用细胞刮刀将细胞收集于冻存管,4℃1500rpm离心去除上清后得到细胞,置于液氮速冻。

    2、细胞团块收集:

细胞团块加1ml 预冷PBS重悬(注意不要过于剧烈造成细胞破裂),4℃ 1000rpm离心5分钟,弃上清,重复3次,4℃1500rpm离心去除上清后得到细胞,置于液氮速冻。

    3、悬浮细胞收集:

将培养完成的细胞,转移至EP管,1000rpm离心5分钟,弃上清,加1ml 预冷PBS重悬,4℃1500rpm离心去除上清,重复一次,得到细胞,置于液氮速冻。

    4、保存与运输:

    ① 收集并液氮速冻的细胞保存于-80℃冰箱,可保存3个月。

    ② 与PCR不同,提取蛋白所用的RIPA裂解液不能保持蛋白的稳定,所以尽量运输完整的细胞(干冰运输)。

二、组织的采集、处理和保存

    1.组织收集:取材应在冰上进行,取材后组织用生理盐水冲洗干净,去除血渍和污物,并剔除非研究所需的组织。取动物的组织,动作要求迅速,尽量避免样本在环境中暴露太久。

     2.组织处理:取材完成后吸干水渍并切小块,放入已标记的冻存管中,液氮速冻后,转运至-80℃冰箱。

     3.保存:新鲜的组织可以在-80℃冰箱保存半年左右,1年内冻存组织均可尝试进行定量WB实验;

     4.运输:干冰运输。


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